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        實驗病理切片技術


        一、 固定
        1、 固定的意義:
        固定的目的是使蛋白質等成分凝固,及時固定可使組織結構或細胞形態更接近生活狀態。同時,固定可使組織硬化成形,便于后續的包埋、切片以及染色。因此,固定是實驗室病理切片技術中非常重要的環節。
        2、 固定劑選擇
        固定劑種類較多,但目前沒有通用于能使所有被固定的細胞、組織成分都達到最佳固定效果的固定劑。目前應用范圍最廣的是10%中性甲醛溶液和4%多聚甲醛。
        3、 固定方法
        (1) 浸泡固定
        取出待檢組織浸泡于固定液中,固定液必須足量,一般是組織塊總體積的50倍,固定時間一般為48-72h,保證固定液充分滲入組織。
        (2) 灌注固定
        用于腦、心臟,肝、腎、肺組織標本的固定,通過體內血液循環系統對實驗動物全是各臟器的固定。

        二、 取材
        由于取出的新鮮組織較柔軟,不易直接切割成實驗所需形狀。組織經過固定,因固定劑的滲入,使蛋白質變性凝固,形成一定的硬度而容易修整切取,此過程稱為取材。
         
        實驗所取的器官組織不可能全用于制片,要根據實驗目的,選擇性取材。對局灶性病變取材,要包含病變部位以及鄰近的正常組織區域??傊?,取材部位要使實驗目的能在制片標本上得到完全反映。

         
         

        三、 脫水
        1、 脫水目的
        組織經固定后仍含有大量水分,以石蠟為包埋劑時,由于水與石蠟不能混合,應在浸蠟包埋前使用脫水劑逐步將組織中水分置換出來,這一過程稱為脫水。
        2、 脫水步驟
        低濃度至高濃度乙醇依次梯度脫水,再經歷二甲苯置換,最終浸蠟完成脫水

         
         

        四、 包埋
        浸蠟后的組織與熔化的石蠟在模具中冷卻固定為一定形狀的過程稱為包埋。

         

        五、 切片
        組織經石蠟包埋后,再用切片機制成切片的過程稱為切片。
        切片是制片過程中很重要的環節,優質切片要求組織切片薄、平整、邊緣齊,無刀痕、褶皺、龜裂等。病理切片厚度一般3-5&mu;m,腦組織和脂肪組織稍厚,以6-8&mu;m為宜。

        六、 染色
        染色是染色劑和切片組織細胞相結合的過程,目的是使組織標本各部分在光學顯微鏡下能清晰的顯示出來,觀察各組織結構和病變
        分類:
        常規染色:HE染色
        特殊染色:油紅O染色、天狼星紅染色、masson染色
        免疫組化染色

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