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        MDC檢測方法


        一、主要試劑材料

        細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)(Solarbio,G0170)

        DMEM(Hyclone,SH30023)

        FBS(Hyclone,SH30070.03)

        青鏈霉素(Hyclone,SV30010)

        胰酶(Hyclone,SH30042.01)

        PBS(南京生興,SN331)

        CO2培養箱(Thermo fisher,3131)

        Confocal熒光顯微鏡(Zeiss,LSM710)


        細胞自噬染色MDC檢測.png


        二、實驗方案

        1、MG63及其耐藥株培養在含10%胎牛血清的DMEM完全培養基中培養,培養在37℃含5%CO2的細胞培養箱中培養,當細胞增殖至80%-90%時,用胰酶將細胞消化下來,按照1:3比例傳代。

        2、將1×106個細胞種在3.5cm玻璃底培養皿中,將細胞放入培養箱中培養過夜后,分別加入miR-22、cisplatin、cisplatin和miR-22后,將細胞放入培養箱中培養12h、24h。

        3、將細胞從培養箱中取出,去除培養基,用300~400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次,棄上清。

        4、加入適量MDC Stain,輕輕混勻。

        5、室溫避光染色15~45min。

        6、用300~400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次,棄上清。

        7、加入100μl的Collection buffer重懸細胞,滴加于載玻片上并加蓋玻片。

        8、熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm,阻斷濾光片波長512nm),拍照。


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